正相？反相？手性分離模式如何選擇？

更新時間：2023-09-12 點擊次數：1920

哈嘍，小伙伴們，還記得上個世紀五、六十年代震驚世界的“反應停事件"嗎？反應停學名為沙利度胺Thalidomide，結構見下圖，其消旋體曾被用作緩解妊娠反應的藥物。但是后來才發現其中的R-型異構體才是有效的抗嘔吐成分，可減輕妊娠e心、嘔吐等癥狀；而S-型異構體則會導致嬰兒畸形，結果當時在西德、荷蘭和日本等地區產生了大批的畸形兒。

隨著生物工程和生命科學的發展，科學家已經認識到，手性化合物例如手性藥物異構體盡管其物理和化學性質幾乎wan全相同，只有旋光性不同，但它們在生物體內的生理活性和藥理作用卻存在很大的差別。為此，制藥行業中，必須對有效成分的對映體進行拆分，而不能將其混合物作為藥物出售。

采用液相色譜法分離手性化合物，是目前shou選方法之一，要考慮手性柱的固定相類型、分離模式及流動相溶劑。現在市面上手性固定相類型較多，手性色譜有正相分離和反相分離兩種模式，流動相溶劑的選擇與固定相、樣品性質、分離模式有關。今天，小編就和大家聊聊，如何選擇合適的手性分離模式。

正相分離模式

當樣品溶于非極性溶劑中，選擇正相分離模式。常用的流動相組合是烷烴類和醇類。其中，醇類起到了洗脫作用，烷烴類用來調節流動相的洗脫強度。

烷烴類試劑，可選擇正己烷、正戊烷、異己烷、正庚烷，它們對樣品分離沒有太大影響，不會改變選擇性和分離度，選擇正己烷較多。

流動相中的醇類，對目標物的分離起關鍵作用，不同的醇有不同的選擇性，且隨著流動相中醇類的比例提高，目標峰的保留時間縮短。zui常用的醇類是乙醇和異丙醇，它們的洗脫能力是：乙醇>異丙醇。甲醇在烷烴中的溶解性不好，正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烴中加入甲醇，最好同時加入一定量的乙醇，提高流動相的溶解性。

在手性色譜中，為改善目標物的峰形，需要在流動相中添加酸或者堿。如果目標物是酸性化合物，往往要在流動相中加入酸性添加劑，如三氟yi酸、乙酸、甲酸等。如果目標物是堿性化合物，要在流動相中加入堿性添加劑，如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或堿性添加劑的加入量一般為0.1%~0.3%，最大不超過0.5%，要注意色譜柱的pH耐受范圍。

需要注意的是：

1、正相色譜柱安裝前，必須先用合適的流動相沖洗整個儀器管路，包括進樣器。有些試劑（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF）會破壞手性固定相的結構，請不要使用這些溶劑作為流動相的組成部分，或者作為樣品稀釋劑。如果有無法確定的，請咨詢廠家。

2、色譜柱能使用純甲醇或者純乙腈作為流動相，如果要將正己烷換成甲醇或者乙腈，或者換成其他極性溶劑，需要用純異丙醇作為溶劑充分過渡。

3、正相手性柱應避開含水的流動相。

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應用案例

溴甲ji苯異丙酸消旋體的測定

液相條件

色譜柱：Ultimate^® Cellu-J（4.6×250mm，5μm) 。

流動相：正己烷：乙醇：三氟yi酸（90：10：0.1）；

檢測波長：220nm；

柱溫：25℃；