正相色譜，出峰漂移，月旭帶你一探究竟

更新時間：2022-12-23 點擊次數：1805

正相色譜是我們色譜分離中一種常用的分離模式。其分離原理是基于固定相的極性大于流動相，通過吸附作用，實現不同極性物質之間的分離。正相色譜的優勢是可用于分離反相色譜不保留或極性較強的化合物，且適用于絕不溶于水的物質分離。

但是正相色譜也有困擾我們的難題。經常會有老師在使用正相色譜柱時出現出峰保留時間漂移的情況，有些是使用的正相柱子，樣品出峰不斷地有前移的趨勢，有些是新買的正相柱子分離樣品保留時間和原有的舊柱子不一致等。

這到底是怎么回事呢，出現這類保留時間漂移的問題又該如何解決呢？今天小旭就帶大家一探究竟。

首先我們簡單介紹下正相色譜

? 定義：

固定相的極性大于流動相，基于固液吸附的原理，分離不同極性的樣品。

? 洗脫順序：

極性低的物質先被洗脫出來。流動相的極性越強，洗脫能力也越強。

? 常見的正相色譜柱有：

硅膠柱，二醇基柱，氨基柱，氰基柱。

? 常用的流動相：

主要試劑：烷烴（戊烷，己烷，庚烷，辛烷），芳香烴（苯，甲苯，二甲苯），二氯甲烷，四氯化碳。

輔助試劑：甲基-t-丁基醚（MTBE），yi醚，四氫呋喃（THF），乙酸乙酯，乙腈，丙酮等。

正相色譜的優勢是可用于分離反相色譜中不保留或極性較強的化合物，且適用于絕不溶于水的物質分離，還可用于拆分異構體。但正相色譜中，卻易出現保留時間漂移的情況。這究竟是什么原因呢？

原來正相色譜柱的固定相，特別是硅膠柱中未改性的裸硅膠，其中的硅醇基的極性特別強，其對流動相中甚至是實驗環境中的水分含量非常敏感。而由于正相色譜中固定相的水分含量常常是個影響選擇性的關鍵參數，流動相中的水分含量通常影響保留時間和分離度。我們知道大部分溶劑都含有小部分的溶解水，比如正己烷在20℃下，其水分含量是0.0111%w/w。因此正相色譜中出現保留時間波動較大的問題，大多可歸因于固定相或流動相中水分含量的變化，而填料可能還是完好的。

那么正相色譜中，出現這種固定相或者流動相中的水分含量影響物質保留時間的問題，該如何解決呢？

小旭給大家分享兩個解決方法：

1、去除固定相上的水分

用含2.5%二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30個柱體積；

2、使用水分含量可控的流動相（比如：用水半飽和）

半飽和流動相配置方式：將無水的非極性流動相分成兩半；其中一半中加入一定量水，并混勻攪拌約一小時，靜置分層后，將多余的水相全部除去；將兩部分非極性流動相重新混合在一起就配成了“半飽和"流動相。

快來看一個案例吧~

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? 售后案例背景

客戶新買的Topsil^®（拓譜）Silica硅膠柱，在做一個老項目時，目標化合物的保留時間出現了漂移。同時對比舊柱子上目標化合物的保留時間是在10min左右，而新柱子的目標化合物的保留時間卻出現在了20min左右。

色譜條件：

色譜柱：月旭Topsil^®Silica（4.6×250mm，5μm)。