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反相色譜法中有種特殊的模式非水反相色譜法（NARP），色譜柱是非極性（如C18），流動(dòng)相顧名思義非水全部由有機(jī)相組成。非水反相色譜（NARP）中主要用來(lái)分離疏水性很強(qiáng)的樣品，這些樣品的保留能力很強(qiáng)，如脂類(lèi)、合成聚合物等。非水反相色譜中的流動(dòng)相是由極性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑A和極性較弱的有機(jī)溶劑B組成。通常A溶劑常用的是乙腈或甲醇，B溶劑是四氫呋喃、異丙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚或者其他極性較弱的有機(jī)溶劑。樣品保留是通過(guò)改變%B或B溶劑的極性來(lái)控制的。
反相色譜法的保留機(jī)制長(zhǎng)久以來(lái)都是研究重點(diǎn)。溶質(zhì)分子在固定相的定位可能有幾種形式存在，如疏溶劑作用、吸附作用、分配作用等。疏溶劑相互作用假定了溶質(zhì)分子與配合基對(duì)齊并且附著在它上面。吸附意味著溶質(zhì)分子并沒(méi)有滲透到固定相里面而是保留在固定相和流動(dòng)相液體之間。分配作用為固定相和液體類(lèi)似，溶質(zhì)分子溶解在里面。見(jiàn)下圖：
其中疏溶劑的作用是接受比較廣的理論：相對(duì)而言，疏水性的溶質(zhì)分子比較喜歡吸附在疏水性的烷基基團(tuán)上，因此也叫疏水性保留。反相色譜法中鍵合的烷基等非極性固定相，流動(dòng)相為水、有機(jī)溶劑、緩沖液等極性溶劑。鍵合相鏈越長(zhǎng)、疏水性越強(qiáng)，溶質(zhì)的保留值越大；流動(dòng)相表面張力越大、介電常數(shù)越大、極性越強(qiáng)，溶質(zhì)與鍵合相的作用越強(qiáng)，流動(dòng)相的洗脫能力越差，溶質(zhì)保留值越大。溶質(zhì)的極性越弱，疏水性越強(qiáng)，保留值越大。
對(duì)于非水反相色譜法，原理和反相色譜法一致。固定相為非極性固定相。樣品由于疏水性較強(qiáng)，保留較大，不采用強(qiáng)極性水溶液作為流動(dòng)相，全部由有機(jī)溶劑組成。
非水反相色譜法方法優(yōu)化同反相色譜法，主要通過(guò)改變%B或B溶劑的極性來(lái)調(diào)節(jié)，等度或梯度都能使用，同時(shí)柱溫對(duì)樣品的分離也有影響。一般采用sou選采用ACN（A）和THF（B）的混合溶劑為作為初始流動(dòng)相。若用100%THF樣品保留仍太強(qiáng)，可以用極性較弱B溶劑（如二氯甲烷或氯仿）來(lái)替換，但是應(yīng)考慮使用二氯甲烷或氯仿的檢測(cè)波長(zhǎng)。
非水反相色譜法為反相色譜法的一種特殊模式，色譜柱同反相色譜法常用的非極性色譜柱，流動(dòng)相全為有機(jī)相，樣品保留是通過(guò)改變極性較弱溶劑的極性來(lái)控制；主要分離疏水性很強(qiáng)、不溶于水的樣品。在平時(shí)工作中，遇到類(lèi)似物質(zhì)可以考慮使用非水反相色譜法。
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