蛋白含量測定常用方法有哪些？

更新時間：2021-12-29 點擊次數：2704

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蛋白純化是目前生物研究鄰域中較為熱門的一個大方向，其中蛋白含量測定是純化過程中很重要的一項內容。

zui常用的蛋白含量測定分析方法有：馬斯亮藍法（Bradford）、Folin-酚試劑法（Lowry）、BCA法等。

Folin-酚試劑法（Lowry）：蛋白質在堿性溶液中肽鍵與Cu²⁺鰲合，形成蛋白質-銅復合物，還原酚磷鉬酸，產生藍色化合物，藍色深淺與蛋白質濃度呈線性關系。靈敏度在1-5μg/mL，是目前zui靈敏的測定方法，但耗費時間長，操作需嚴格計時，顏色深淺隨不同蛋白質而變化，因為其中的酒石酸鉀-硫酸銅試劑配置保存困難，逐漸被考馬斯亮藍法取dai。

考馬斯亮藍法（Bradford）：考馬斯亮藍G-250染料與蛋白質結合呈藍色，在波長595nm有吸收峰，在一定的范圍內與蛋白質的含量呈線性關系。靈敏度在25-250μg/mL左右，應用廣泛，顏色穩定，專一性較差，干擾物質多。

BCA法：BCA法基于雙縮脲原理，堿性條件下蛋白質將Cu²⁺還原成Cu⁺，BCA鰲合Cu⁺作為顯色劑，產生藍紫色并在562nm有吸收峰，單價Cu⁺與蛋白質呈劑量相關性。靈敏度在0.5-20μg/mL之間，用于快速檢測，抗干擾能力強，但受金屬螯合劑影響。

每種測定方法都不是wan美無缺的，都有其優缺點，在選擇時應考慮：

① 試驗所要求的靈敏度和精確度；

② 蛋白質的性質；

③ 溶液中存在的干擾物質；

④ 測定時所耗費的時間等因素。

就具體情況選擇最合適的試驗方法。

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